| هدف : اخیرا استفاده از سیستم های دستکاری ژنتیکی مورد توجه قرار گرفته است. ابزار CRISPR/cas9 یکی از این سیستم ها می باشد که به دلیل کارآمدی، هزینه ی کم ، سرعت بالا مورد توجه قرار گرفته است. اجزای این سیستم شامل gRNA ، pam و آنزیم cas9 می باشد . محققان به منظور افزایش کارایی بیشتر این سیستم ، تغییراتی را روی gRNA و ca9 ایجاد کرده اند. از طرفی شکل های مختلف آنزیم cas9 بر طراحی gRNA تاثیرگذار است . هدف ازاین پژوهش طراحی و مقایسه ی قطعه ی gRNA در حالت های wild type cas9 و cas 9 nickase میباشد. روش: جستجو و انتخاب عبارت tp53 در سایت ATUM به عنوان ژن هدف برای طراحی gRNAانجام گردید. سپس طراحی gRNA در دو حالت wild type cas9 و cas9 nickase با انجام شد و gRNA هایی با بالاترین امتیاز انتخاب شدند . نتایج : در حالت cas9 wild type ، سایت مذکور یک gRNA با یک جایگاه برش را برای توالی هدف نشان داد . در حالت cas9 nickase ، سایت مذکور دو gRNA با دو جایگاه مختلف برش را در توالی نشان داد. بحث: آنزیم cas9 دارای دو بخش عملکردی می باشد . آنزیم در این حالت می تواند دو رشته را برش دهد ولی در حالت cas9 nickase در یکی از دومین های عملکردی جهش ایجاد شده است بنابراین فقط میتواند در یک رشته را برش ایجاد کند و اگر با دو gRNA مناسب همراه شود، امکان ایجاد دستکاری در ابعاد کوچکتر را فراهم کند. |