| بهینه سازی بیان پروتئین نوترکیب CAP18 در مخمر متیلوتروفیک پیکیا پاستوریس |
| کد مقاله : 1212-5VBS |
| نویسندگان |
|
آزاده لهراسبی نژاد *، فائزه حبیب اللهی گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران |
| چکیده مقاله |
| امروزه مقاومت به آنتی بیوتیک های کلاسیک به دلیل مصرف بسیار زیاد آن ها افزایش یافته است. استفاده از پپتیدهای آنتی باکتریال(AMP =Antimicrobial peptide) یک استراتژی جدید برای جایگزینی آنتی بیوتیک ها به منظور حل این معضل و نگرانی های جهانی در این مورد می باشند. این پپتیدها ازمهمترین عوامل ایمنی ذاتی میزبان اندکه به طورطبیعی توسط همه ارگانیسم های گوناگون تولید می شوند و اولین مانع دفاعی دربرابر عوامل باکتریایی قارچی و ویروسی هستند. CAP18 یک پپتید ضدمیکروبی ترشحی متعلق به خرگوش (Oryctolagus cuniculus) و از خانواده کاتلسیدین ها می باشد و فعالیت های ضد میکروبی بالایی در برابر طیف گسترده ای از باکتری های بیماری زا، قارچ ها و ویروس ها دارد، این پپتید دارای171آمینواسید و وزن مولکولی kDa 18 می باشد. دراین پژوهش به منظور بهینه کردن شرایط سنتز پروتئین نوترکیب CAP18در مخمر متیلوتروفیک Pichia Pastoris متغیرهای دما، نوع محیط کشت و درصد متانول در نظر گرفته شدند. میزان بیان پروتئین نوترکیب در محیط کشت YPD وBMMY بررسی شد. بهینه سازی دمایی در دماهای28،25،23درجه سانتیگراد انجام شد و تاثیر متانول 5/0 و 1 درصد در هر 24 ساعت یکباراندازه گیری شد. همزمان نمونه برداری از تمامی محیط های القا شده در ساعات 90، 78، 66، 54 ، 48، 42،30 ،18 ،6 ساعت انجام گردید. سپس میزان بیان پروتئین CAP18 درمحیط کشت هریک از محیط های القا شده، با ژل SDS-PAGE مشخص گردید و مشاهده شد بهینه‌ترین شرایط سنتز پروتئین درمحیط YPD دمای23 درجه، متانول 1درصد در زمان 54 ساعت است. |
| کلیدواژه ها |
| بهینه سازی ، CAP18 ، پپتید آنتی باکتریال ، مخمر متیلوتروفیک |
| وضعیت: پذیرفته شده |